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液相色谱聚合色谱柱的再生方法

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时间:2019-07-25 10:21:56

液相色谱仪因其对沸点低的高分子化合物的精度较高,在生物医药行业有较为广泛的应用。用来别离生物分子的聚合柱长期运用会被污染,然后较低柱效,影响检测的速率和灵敏度。因此,须定时进行清洁。

聚合资料的化学稳定性通常以作用力来衡量。一般情况下,首要运用硝酸或氢氧化钠溶液来清洗。一些反相聚合色谱柱的清洗办法如用聚苯乙烯-二乙烯基苯小球和聚合单体,如CIM RP-SDVB片和Swift柱子,能耐宽的pH规模(通常pH11~13或有时pH0~14),但运用者用强有机溶剂冲刷柱子时要注意,由其交联度决定,当柱子用某些有机溶剂冲刷时就会胀大或缩短。高于8~10%交联度的聚合物通常有较好的机械性能在水溶液中缩短很少,在有机溶剂中胀大也不大。

再生聚苯乙烯-二乙烯基苯全体柱的办法如下:运用含0.1%的2-丙醇在一半作业流速下冲刷10个柱体积以上;100%流动相B在作业流速一半的条件下冲刷5个柱体积以上;用100%流动相A在作业流速下至少平衡10个体积以上。

含有丁基和乙基化学物质甲基丙烯酸酯全体柱的清洗办法,清洗液相色谱硅胶键合反相柱上的蛋白质残留可以通过按顺序反向冲刷10个柱体积的氢氧化钠、水、20%乙醇溶液和作业缓冲液来铲除。如果有很多疏水蛋白质,运用者应该在水今后插入一个30%异丙醇或70%乙醇的过程。

如果要清洗或灭活微生物菌落,聚苯乙烯-二乙烯基苯可以用0.5~1.0M的氢氧化钠完全清洗。全体柱在室温下至少要用氢氧化钠洗一个小时。

用传统聚合基质装填的柱子来别离一些溶解度很小的蛋白质如膜蛋白、结构蛋白、和病毒外壳蛋白等需要用较强的清洗条件。例如含3M盐酸胍的50%异丙醇溶液在60℃才能把这些蛋白质除去。

在固相树脂中去除合成肽能产生从头激活被苯甲醚和苯硫基甲烷铲除的正离子。铲除正离子反应产生了大的芳香族分子,这些芳香族分子会在肽纯化时污染柱子。这种污染物在C18色谱柱子上有非常高的保留没法被100%的甲醇或乙晴洗出。要清洗这类柱子,必须把柱子反向用5体积100%异丙醇,三到五个体积二氯甲烷,然后三到五体积异丙醇,zui后到初始溶剂体系。芳香族不纯物的洗脱可以通过260nm紫外检测。




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