液相色谱基线噪音的改善方法
基线噪音是做液相的同学经常感到头疼的问题,尤其是在做痕量分析的时候。今天，我们来分析下噪音的来源，以及如何减小和消除噪音。
一、 多种流动相的在线混合
流动相在线混合是为了简化实验步骤，流动相混合的不充分是基线噪音的一个重要来源。
流动相混合方式主要两种：
1.低压混合：采取时间脉冲的方式，利用比例阀，将不同流动相按一定比例混合。
2.高压混合：利用多个泵头，控制每个泵的流量，来将流动相按一定比例混合。
从流动相开始混合在一起，到流动相到达色谱柱头，这一段体积叫做延迟体积(Delay Volume)。混合器体积越大，混合越好，但是相应延迟体积就越大，会造成梯度的延迟。换句话说，就是流动相的变化，需要一定时间后，才能真正到达色谱柱，对分离产生影响。这个现象在使用UPLC或者UHPLC的时候，会有比较明显的作用。
那如何减小因为混合而造成的基线噪音呢？
1.对于等度的方法：非常简单，预混流动相就可以了。
2.对于梯度的方法：部分预混流动相也会帮助更好的混合，怎么做呢？看下面的例子。
方法要求乙腈/水比例从10%走到85%。那可以将流动相A配成10%的乙腈，流动相B配成85%的乙腈，然后A/B梯度从0%走到100%。这就是部分预混。
3.增大混合器的体积：一般混合器的体积从几百ul到几ml都有，在允许的延迟时间下，更换一个体积更大的混合器，能够有效提高混合的效率。
二、液相硬件问题造成的基线噪音
如果液相系统某些地方的工作不正常，也可能造成基线的噪音。
1.系统有漏：特别是肉眼无法发现的微漏或者泵的内漏，会造成流速的变化和混合比例的变化，从而导致基线噪音。
检查的方法就是对系统进行压力测试：将系统从某个地方用死堵堵上，如泵出口，或者自动进样器出口，将压力升高到350bar后停泵，监测压力下降的情况。一般的标准是2-3bar/min的下降是正常水平。或者15%/10min的下降。
2.梯度比例问题：可以对系统进行一个梯度测试，来检查梯度混合是否准确和一致。
梯度测试
a.将A配成0.1%的丙酮，B是水。
b.在265nm的波长下，将A的比例从10%，20%，30%这样一个一个的升高，每个比例走3min。
c.可以根据计算，看每个基线台阶上升是否准确。
d.也可以从0-100%走一个连续的梯度，看基线上升的平滑性和线性。
三、流动相脱气不好造成的基线噪音
对流动相进行脱气，不仅仅是为了防止系统里面气泡的产生。流动相脱气越好，基线就会越好。
如今最常用的脱气方式是在线脱气机，但是有的时候脱气并不彻底。所以当有基线噪音问题时，可以考虑采取多种脱气方式。
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