反相液相色谱柱原理及运用维护介绍
反相液相色谱柱原理介绍
反相液相色谱柱是根据溶质、极性活动相和非极性固定相表面间的疏水效应建立的一种色谱形式，任何一种有机分子的结构中都有非极性的疏水部分，这部分越大，一般保留值越高，在液相色谱中这是运用面较广的一种别离形式，在生物大分子的反相液相色谱条件下，活动相多选用酸性的、低离子强度的水溶液，并加一定比例的能与水互溶的异丙醇、乙腈或甲醇等有机改性剂，很多运用的填料为孔径在30纳米以上的硅胶烷基键合相，除此之外，也有少数高聚物微球。
反相液相色谱柱的运用和维护
在日常别离剖析工作中，反相液相色谱柱的正确运用和维护十分重要，色谱柱运用是否妥当，直接影响色谱柱的寿命，稍有不慎就会下降柱效、缩短运用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，需求留意下列问题，以维护色谱柱。
(1)柱子在装卸、替换时，动作要轻，接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动，避免柱床产生空地。
(2)假如仪器用来做惯例剖析，样品种类有限，但剖析次数多，则不妨为每一类惯例剖析配置一根专用柱，这样有助于延伸柱子的寿命。
(3)避免压力和温度的急剧变化及任何机械轰动。温度的忽然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的忽然升高或下降也会冲动柱内填料，因此在调理流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
(4)应逐
渐改动溶剂的组成，特别是反相色谱中，不该直接从有机溶剂改动为全部是水，反之亦然。
(5)如运用柱温操控设备时，应留意在通人活动相后才干升温。
(6)一般说来反相液相色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱能够反冲时，才能够反冲除掉留在柱头的杂质。否则反冲会迅速下降柱效。
(7)选择运用适合的活动相，以避免固定相被破坏。有时能够在进样器前面连接一个预柱，剖析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使活动相在进入剖析柱之前预先被硅胶“饱满”，避免剖析柱中的硅胶基质被溶解。
8)避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内，需求对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个维护柱。维护柱一般是填有类似固定相的短柱。维护柱能够并且应该经常替换。
(9)经常用强溶剂冲刷色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路体系中活动相的置换应以相混溶的溶剂逐步过渡，每种活动相的体积应是柱体积的20倍左右，即惯例剖析需求50-75mL。
(10)保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
(11)反相液相色谱柱运用过程中，假如压力升高，一种或许是烧结滤片被堵塞，这时应替换滤片或将其取出进行清洗；另一种或许是大分子进人柱内，使柱头被污染；假如柱效下降或色谱峰变形，则或许柱头出现塌陷，死体积增大。
(12)在完成别离剖析工作之后，不该当即停机，需及时对色谱剖析体系进行冲刷，一般0.5h以上，以除掉色谱柱内的杂质。
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